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技术支持



重要信息

产品提示:

您从澳赛尔斯(上海)有限公司购买的产品仅供研究用,根据国家食品卫生管理的有关法规,这些产品不适用于临床诊断及治疗.    

您一旦购入这些产品,表明您已接受以下条件:    

  1. 即使现有的血清学检测结果都是阴性,也会被当做潜在性污染的样本处理。   

  2. 能够建立和遵循恰当的安全控制程序,保证使用这些产品的安全性。

注意

    新鲜细胞产品请立即使用。    

    冷冻的细胞产品请务必放入液氮罐。


如何正确复苏冻存HUVEC的细胞

1. 37℃水浴预热培养液(H-004)。

2. 从液氮中取出细胞产品管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直到管中只剩下最后一片结晶(注意:不要让水没过产品管)。 75%的酒精擦拭产品管外壁。

3. 产品管中的细胞移至15ml无菌离心管中,慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液(H-004B培养液45ml混匀,边加边摇匀。

4. 1ml的培养液冲洗产品管,向15ml离心管中加入冲洗的细胞悬液,边滴加边摇匀。

5. 10μl细胞悬液和10μl台盼蓝混匀后,取10μl计数。
这一步骤非常重要,能确定您收到的产品是否合格(详见如何计数复苏的细胞)

6. 细胞悬液在1500rpm,室温条件下,离心10分钟,去除上清。

7. HUVEC完全培养液45ml轻轻混匀细胞,备用。

8. 接种前将 T25培养瓶中的包被液吸去,按25005000个细胞/cm2接种细胞。(1支冷冻的细胞可以种一瓶T25培养瓶)

          9. 每个培养瓶中加完全培养液H-0043-5ml, 后置于375%CO培养箱内培养


如何计数复苏后的细胞

    当您收到正确的产品时,需要计数细胞以确定其数量和活性。    由于在洗涤和离心的过程中会细胞的, 因此我们建议您在复苏时计算;同时请您严格按照复苏规程操作。    用适当的吸液器将细胞混匀。取10ul的细胞悬液。用0.4%台盼兰作1:1的稀释(如果需要,可以用PBS做更大稀释)请计数血球计数板上四个大格的细胞。

    产品管中总的细胞数为=N/4×2×d×104 ×总体积(ml)

         N=血球计数板上四个大格的细胞         d=稀释倍数。

    如果你计数的细胞明显少于我们声称的细胞数,请按以下步骤操作:    

(1) 检查细胞悬液是不是有细胞团。如果有的话,试着用较细的注射器针管分离或用1000μl的枪头混匀后,再次计数。    

(2) 最佳的细胞浓度是在血球计数器每个大格里有50-100个细胞(总的200-400)。如果不是,请做适当的浓度稀释后,再计数一次。

(3)请立即与我们联系。021-31778072


如何计算大鼠胰岛的IEQ值

一般情况下,直径大小为150um 的胰岛细胞 = 1 IEQ.

胰岛 IEQ 对照表:

直径大小(um)IEQ值
50-1000.17
101-1500.67
151-2001.7
201-2503.5
251-3006.3
301-35010.4
351-40015.8
>40022.7

显微镜下记录细胞大小和数量后,请按以上对照表计算,再乘以稀释倍数就是总的IEQ值。

例如:您从3ml细胞悬液中取出50ul,观察计数后得出:

        50-100 um 有5个胰岛

        101-150 um 有3个胰岛

        151-200 um 有2个胰岛

        201-250 um 有4个胰岛

那么总的IEQ值=60×(0.17×5+0.67×3+1.7×2+3.5×4)=1215.6 IEQ


如何计数新鲜细胞

当您收到正确的产品时,需要计数细胞以确定其数量和活性。这一步骤非常重要,能确定您收到的产品是否合格

1. 在生物安全柜(超净工作台)中,将细胞混匀。细胞在1.5ml和2ml试管中的,请选用1000μl的枪头混匀;在5ml,15ml或50ml的试管中的,请选用5ml的移液管混匀。

2. 从试管中取10μl细胞样品,和10μl胎盘兰混匀后;加入细胞计数板中,进行细胞计数。

选取正确的稀释倍数,对正确计算细胞数量和细胞活性是非常重要的表1:推荐的稀释倍数

试管规格细胞量细胞取样0.4%台盘兰PBS(1×)稀释倍数
1.5ml0.5-1×10610μl10μl-2
2ml0.5-1×10610μl10μl-2
5ml5×10610μl10μl-2
15ml10×10610μl10μl-2
15ml15-20×10610μl10μl80μl10
50ml30-100×10610μl10μl80μl10

N = 细胞计数板上四个大格的细胞量D = 稀释倍数细胞数量和活性计算公式:细胞数量 = N/4×D×_ml = _ × 104细胞活性 = 没有染上台盼兰的细胞/全部的细胞×100%

如果你计数的细胞明显少于我们声称的细胞数,请按以下步骤操作:

(1) 检查细胞悬液中是不是有细胞团。

如果有的话,请用1000μl的枪头轻轻吹打混匀后,再次取样计数。

(2) 最佳的细胞浓度是在计数板中的每个大格里有50-100个细胞(总数200-400)。

如果不是,请做适当的浓度稀释后,再计数一次。

(3) 请立即与我们联系,021-31778072。


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